按照實(shí)驗(yàn)室的安全工作制度或安全標(biāo)準(zhǔn)操作程序，所有操作符合《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB19489-2008）。

1、嚴(yán)格執(zhí)行各區(qū)功能劃分：

試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)：貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液的準(zhǔn)備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。

標(biāo)本制備區(qū)：核酸（RNA、DNA）提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管。對(duì)于涉及臨床樣本的操作，應(yīng)符合生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室防護(hù)設(shè)備、個(gè)人防護(hù)和操作規(guī)范的要求。

擴(kuò)增區(qū)：cDNA合成、DNA擴(kuò)增及檢測(cè)。

擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增片段的進(jìn)一步分析測(cè)定，如雜交、酶切電泳、變性高效液相分析、測(cè)序等。

試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)和擴(kuò)增區(qū)內(nèi)的實(shí)驗(yàn)用品，包括移液器等器具應(yīng)專用，空氣、物品流向依次為：試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)，不可逆行。

2、清潔的實(shí)驗(yàn)用品：

實(shí)驗(yàn)室自配試劑（去離子水、緩沖液等）和所有使用器具在使用之前均應(yīng)高壓滅菌或紫外殺菌。槍尖、反應(yīng)管等實(shí)驗(yàn)耗材應(yīng)一次性使用。

3、正確的實(shí)驗(yàn)操作：

實(shí)驗(yàn)應(yīng)在超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行，工作臺(tái)內(nèi)應(yīng)放置PCR專用的微量離心機(jī)、各量程的移液器和其他物品。

實(shí)驗(yàn)的過程中選擇合適尺寸的手套并能及時(shí)更換，在進(jìn)出不同實(shí)驗(yàn)區(qū)域或進(jìn)行模板操作后都應(yīng)更換實(shí)驗(yàn)服、口罩、帽子及手套，以避免不同實(shí)驗(yàn)區(qū)交叉污染。

裝有PCR試劑的反應(yīng)管在打開之前應(yīng)先瞬時(shí)離心，將管壁及管蓋上的液體離至管底，降低污染手套或加樣器的風(fēng)險(xiǎn)；謹(jǐn)慎開啟反應(yīng)管，防止管內(nèi)液體濺出或形成氣溶膠導(dǎo)致污染。

吸加試劑和模板的操作應(yīng)嚴(yán)格按照規(guī)范要求進(jìn)行，遵守“慢吸快打”原則，盡量一次性完成，忌多次抽吸，以避免氣溶膠產(chǎn)生的交叉污染。

PCR試劑建議小量分裝，以減少反復(fù)凍融、重復(fù)取樣次數(shù)；多樣本PCR反應(yīng)時(shí)，先配制反應(yīng)混合液分裝至反應(yīng)管中，然后加入樣本核酸，請(qǐng)勿同時(shí)開蓋，盡量保證單人單管，實(shí)現(xiàn)完全閉管操作。

實(shí)驗(yàn)試劑應(yīng)與樣品和PCR產(chǎn)物分開保存，不應(yīng)放于同處。

PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)完成后及時(shí)將反應(yīng)管取出，用一次性手套將產(chǎn)物反應(yīng)管包裹丟棄，保證管蓋緊閉。

4、規(guī)范的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：

應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制的相關(guān)規(guī)定，實(shí)驗(yàn)中設(shè)立陽性對(duì)照、陰性對(duì)照和空白對(duì)照，全程質(zhì)控實(shí)驗(yàn)過程，驗(yàn)證PCR反應(yīng)的可靠性，并協(xié)助判斷擴(kuò)增系統(tǒng)的可信性。