PCR實驗室的污染來源及應急方法

2021-02-22 09:12:51

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PCR實驗室的污染來源

1、樣本間交叉污染：

收集樣本的容器被污染或樣本密封不嚴外溢；不同樣本移液時忘記更換槍尖或未使用帶濾芯槍尖；移液器等實驗器具及耗材未及時消毒滅菌；不同樣本同時開蓋或樣本劇烈震蕩、反復吹吸導致氣溶膠形成擴散，相互交叉污染。

2、實驗試劑污染：

主要是在 PCR 組分試劑加樣過程中，由于移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照污染。加樣過程中，因為 PCR 試劑對溫度十分敏感，需要通過冰浴使得 PCR 試劑和 PCR 板/管處于 0℃，但這個過程也是充滿了污染的風險的。

PCR實驗室的污染來源及應急方法

3、擴增產物污染：

大量拷貝的產物泄漏或擴增后的PCR反應管意外開蓋，這是 PCR 反應中主要常見的污染問題。因為 PCR 產物拷貝量大，遠遠高于 PCR 檢測數個拷貝的極限，所以極微量的 PCR 產物污染，就可形成假陽性。

4、克隆質粒污染：

作為陽性質控品的克隆質粒外溢。

PCR實驗室的污染應急處理方法

1、若核酸樣本溢出：

立即用布或紙巾覆蓋，由外圍向中心傾倒10%的次氯酸消毒劑，約30分鐘后，清除污染物品，再用次氯酸消毒劑擦拭，并用75%酒精噴灑，移動紫外車定點照射1小時。

2、其他不明情況污染：

1、暫停所有實驗操作；2、清理實驗室內所有物品，尋找污染來源；3、加大實驗室的通風；4、對實驗室內所有表面（臺面、地面及墻面）進行消毒；5、75%酒精空中噴霧；6、開啟紫外消毒裝置，延長紫外照射時間（4小時以上）；7、以上措施每日進行，直至污染消除；用新試劑及確認無污染的器材進行原污染項目的試劑空白檢測，連續3次均陰性后方可進行常規檢測。PCR污染的范圍很廣，不同樓層也會產生影響，甚至會影響相鄰建筑；PCR污染的時間很長，幾個月甚至半年；PCR污染的影響很深，影響我們的生產計劃，阻礙我們的研發進度，直接造成公司人力、財力的損失。但隨著新技術和一些問題的明晰，無污染PCR檢測的那一天離我們會越來越近！